S. jasminoides

I VIROIDI
Una nuova problematica fitopatologica delle
Solanacee ornamentali
Francesco Di Serio
Istituto di Virologia Vegetale del CNR, Sede di Bari
XIX Forum di Medicina Vegetale, Locorotondo 11 Dicembre 2007
I viroidi:
I più piccoli agenti infettivi
- RNA infettivi:
di piccole dimensioni (250-400 nt)
non codificano proteine
non sono incapsidati
Patogeni delle piante
Koller and Sogo
Citrus
exocortis
viroid
CEVd
Pear blister canker viroid
PBCVd
Citrus
cachexia
viroid
CCaVd
Crysanthemum chlorotic
mottle viroid
CChMVd
Avocado sunblotch viroid
PLMVd
ASBVd
Apple scar skin viroid
Apple dimple fruit viroid
ASSVd
ADFVd
Peach latent mosaic
viroid
PLMVd
AVSUNVIROIDAE
POSPIVIROIDAE
SPECIES
GENUS
POSPIVIROIDS
PSTVd
(potato spindle tuber)
TCDVd
MPVd
TPMVd
CSVd
CEVd
TASVd
IrVd
CLVd
(tomato chlorotic dwarf)
(Mexican papita)
(tomato planta macho)
(chrysanthemum stunt)
(citrus exocortis)
(tomato apical stunt)
(iresine)
(columnea latent)
HOSTUVIROIDS HSVd
(hop stunt)
CCCVd (coconut cadangcadang-cadang)
CTiVd
COCADVIROIDS HLVd
CVd-IV
APSCAVIROIDS
COLEVIROIDS
SPECIES
GENUS
(coconut tinangaja)
(hop latent)
(citrus IV)
ASSVd
(apple scar skin)
CVd-III
ADFVd
GYSVd 1
GYSVd 2
(citrus III)
(apple dimple fruit)
(grapevine yellow speckle 1)
(grapevine yellow speckle 2)
CBLVd
PBCVd
AGVd
(citrus bent leaf)
(pear blister canker)
(Australian grapevine)
CbVd 1
(coleus blumei 1)
CbVd 2
CbVd 3
(coleus blumei 2)
(coleus blumei 3)
AVSUNVIROIDS
PELAMOVIROIDS
ASBVd
(Avocado sunblotch))
PLMVVd (peach latent mosaic))
CChMVd (Chrysanthemum chlorotic
mosaic))
ELVd
(Eggplant latent viroid)
PSTVd
Malattia del tubero fusiforme della patata
Plant Protection Service, Netherlands
www.eppo.org/.../virus/PSTVd/PSTVD0_images.htm
Plant Protection Service, Netherlands
www.eppo.org/.../virus/PSTVd/PSTVD0_images.htm
http://www.bspp.org.uk/ndr/jan2004/2003-68.asp
Sintomi di accartocciamento fogliare e necrosi in pomodori coltivati infetti da PSTVd
2002
France
Potato
4 potato
cvs
eradicated
2003
UK
Tomato
cv. Passion
eradicated
2004
Germany
Tomato
eradicated
2004
Netherlands
Tomato
eradicated
2006
Netherlands
S. jasminoides
2006
Germany
S. jasminoides
Eradicated
2006
Netherlands
S. jasminoies
Brugmansia
Brugmansia spp.
spp.
under
eradication
2006
Belgium
Tomato
eradicated
2007
Italy
S. jasminoides
S.rantonnetii
S. rantonnetii
under
eradication
2007
Slovenia
S. jasminoides
S.rantonnetii
B. cordata
under
eradication
2007
Netherlands
Streptosolen
jamesonii
“Yellow”
International Society for infectious disease (www.isid.org; www.promedmail.org)
European and Mediterranean plant protection organization (www.eppo.org)
Blue
Album
Solanum jasminoides
Solanum rantonnetii
Brugmansia suaveolens
B. cordata
Brugmansia variegata
Brugmansia x candida
Streptosolen jamesonii
Fine anno 2006:
Limitata indagine su S. jasminoides poi
estesa anche a S. rantonnetti.
Metodo di analisi: ibridazione dot-blot con
sonda PSTVd-specifica
Analisi Dot-blot
A
B
C
Analisi RT-PCR
D
1
2
3
4
5
6
cDNA di dimensioni
attese(360 bp)
7
Controllo positivo
A3 e C3: controlli positivi:
N. benthamiana infette da PSTVd
Caratterizzazione molecolare di 5 popolazioni di PSTVd isolate
Quali effetti patogenici
hanno
surantonnetii
patata e pomodoro le
S. jasminoides
e S.
varianti
Risultati:
TL
1
di PSTVd isolate da solanacee ornamentali ?
P
C
V
TR
Le varianti di PSTVd caratterizzate in Italia sono identiche o solo minimamente
differenti rispetto alla variante di PSTVd previamente isolata da S. jasminoides
e caratterizzata in Olanda
357
X
X
Le infezioni di PSTVd in Italia ed in altri Paesi Europei
hanno una comune origine?
Per chiarire questi aspetti è stata avviata una caratterizzazione
biologica utilizzando ospiti sperimentali adeguati
PSTVd isolato da S. jasminoides (PSTVd-Sj) infetta piante di pomodoro
cv Rutgers
PSTVd-Sj induce sintomi di nanismo in pomodoro cv Rutgers
Esiste un rischio fitosanitario per altre solanacee
Sviluppo di un metodo basato sull’impronta di tessuto (TPH) per la diagnosi
di infezioni di PSTVd in S. jasminoides e S. rantonnetii
TPH
DBH
TPH
DBH
Sr sano
Sr2
Sj Sano
Il metodo TPH sembra valido per la diagnosi di PSTVd in solanacee ornamentali
Validazione del TPH su un totale di 200 campioni prelevati in tre serre di
distinti vivai pugliesi
106 piante di S. rantonnetii
94 piante di S. jasminoides
TPH
1
S.rantonnetii
S. jasminoides
S.rantonnetii
S. jasminoides
S.rantonnetii
2 3
4
5
DBH
1
6 7 8 9 10 11 12 13 14
A
B
C
D
E
F
G
H
I
L
M
N
O
P
Q
S.rantonnetii
S. jasminoides
S.rantonnetii
S. jasminoides
S.rantonnetii
(C+) (C-) (C+)
2 3
4
5
6 7 8 9 10 11 12 13 14
A
B
C
D
E
F
G
H
I
L
M
N
O
P
Q
(C-)(C+)
Tutti i campioni positivi al TPH sono risultati positivi ai saggi DBH ed RT-PCR
S. jasminoides:
S. rantonnetii:
100 % piante infette
26,4 % piante infette
Difesa delle solanacee ornamentali dalle infezioni viroidali
A monte del processo produttivo:
Costituzione di piante madri libere da viroidi
Mantenimento e frequente controllo fitosanitario delle piante madri
Durante il processo produttivo:
Disinfezione degli attrezzi da lavoro con ipoclorito di sodio (2%)
Produzione in lotti separati con rintracciabilità di filiazione dalle piante madri
Controlli fitosanitari
A valle del processo produttivo:
Controllo fitosanitario dei lotti prima della commercializzazione
Evitare la coltivazione e la conservazione di Solanum ornamentali nei
luoghi di produzione di pomodoro, patata e altre solanacee
Prescrizioni del Servizio Fitosanitario della Regione Puglia
(DETERMINAZIONE DEL DIRIGENTE SETTORE ALIMENTAZIONE 2 luglio 2007, n. 277)
Conclusioni
•PSTVd è presente in Italia su solanacee ornamentali (S.
jasminoides e S. rantonnetii)
•Il viroide si accumula a concentrazioni elevate in questi ospiti
•Le percentuali di piante infette sono risultate molto elevate
•E’ necessario estendere l’indagine ad altre regioni e ad altri
possibili ospiti (Brugmansia spp., Streptosolen jamesoni),
adottando adeguate misure di eradicazione o di contrasto alla
diffusione del viroide
•Il metodo TPH è valido per la diagnosi massale di PSTVd in
solanacee ornamentali
•L’attenzione dovrebbe essere estesa anche ad altri viroidi
(Chrysanthemum stunt viroid)
CSVd determina gravi sintomi in crisantemo
Malforamzioni dei fiori
causate da CSVd
Clorosi fogliari causate
da CSVd
In Olanda sono state segnalate infezioni latenti di CSVd su S. jasminoides (2006)
Rischio alto di trasmissione in serra del viroide ad altre colture floricole
Sarebbe conveniente:
- Escludere anche la presenza di CSVd dalle piante madri di solanacee
ornamentali propagate vegetativamente
- Sviluppare metodi diagnostici in grado di rilevare contemporaneamente,
e discriminare al tempo stesso, i viroidi da quarantena descritti su questi
ospiti
Ringraziamenti
Centro Ricerca e Sviluppo in Agricoltura “Basile Caramia”
M. R. Silletti
N. Trisciuzzi
Servizio Fitosanitario della Regione Puglia
A. Guario
A. Percoco
A. Di Lillo
FINE DELLA
PRESENTAZIONE
RT-PCR
TPH
B
A
1
A
B
C
D
E
F
G
H
I
L
M
N
O
P
Q
2 3
4
5
6 7 8 9 10 11 12 13 14
1
14
28
42
56
70
84
98
112
126
140
154
168
182
196
210
A
B
C
D
E
F
G
H
I
L
M
N
O
P
Q
2 3
4 5 6
7 8 9 10 11 12 13 14
++ + + +
+
++ +
+ + +
+
+++
+
++
++++
+ ++ + ++ +++ + ++ + +
+ ++ + ++ +++ + ++ + +
+ ++ + ++ +++ + ++ + +
+ ++ + ++ +++ + ++ + +
+ ++ + ++ +++ + ++ +
+ + + ++ +
+
++++
+ ++ + ++ +++ + ++ + +
+ +++ +++
+
++
14
28
42
56
70
84
98
112
126
140
154
168
182
196
210
Prima segnalazione di PSTVd in Italia (Di Serio 2007, JPP 89:297-300)
Prima segnalazione di S. rantonnetii come ospite naturale di PSTVd
(Di Serio 2007, JPP 89:297-300)
Avviso immediato dei Servizi Fitosanitari Regionali interessati
Prescrizioni del Servizio Fitosanitario della Regione Puglia
(DETERMINAZIONE DEL DIRIGENTE SETTORE ALIMENTAZIONE 2 luglio 2007, n. 277)