colesterolo hdl - InterMedical, prodotti diagnostici

HDLc-D
COLESTEROLO HDL
Diretto. Enzimatico colorimetrico.
Determinazione quantitativa del colesterolo HDL
Conservare a 2-8°C
IVD
-Cuvette con cammino ottico di 1 cm.
-Attrezzatura generale di laboratorio.
PRINCIPIO DEL METODO
La determinazione diretta del Colesterolo HDL avviene senza
necessità di pretrattamento o centrifugazione del campione.
Il metodo dipende dalle proprietà di un detergente che
solubilizza soltanto la frazione HDL,così che si libera l’ HDLc
per reagire con la colesterol-esterasi,la colesterol-ossidasi e i
cromogeni per dare un composto colorato. Le altre
lipoproteine come l’ LDL,il VLDL e i chilomicroni sono inibiti
dalla reazione con gli enzimi a causa dell’assorbimento dei
detergenti sulle loro superfici.
L’intensità del colore formatosi è proporzionale alla conc. del
colesterolo HDL (HDLc) presente nel campione.
CAMPIONI
Siero o plasma eparinato,libero da emolisi. Non usare
anticoagulanti contenenti citrato. Rimuovere il coagulo appena
possibile. Stabilità: il colesterolo HDL è stabile per 7 gg. a 2-8°C.
PROCEDIMENTO
1.Condizioni operative:
Lunghezza d’onda:
600-700 nm
Cuvette :
cammino ottico 1 cm
T. costante:
37°C
2. Azzerare lo strumento contro acqua dist.
3. Pipettare in cuvetta:
R1 (µL )
Calibr. (µL)
Campioni (µL )
SIGNIFICATO CLINICO
Le particelle di HDL servono a trasportare le lipoproteine nelle
cellule. L’ HDL è anche conosciuto come “colesterolo buono”,poichè
elevati livelli di esso diminuiscono il rischio di malattie
cardiovascolari. Contrariamente,bassi livelli di HDL sono indicativi di
un alto rischio di malattie cardiovascolari.
La diagnosi clinica non dovrebbe essere fatta sul risultato di un
singolo test;essa dovrebbe integrare i dati clinici e gli altri dati di
laboratorio.
Bianco
300
-------
Calibratore
300
3
----
Campione
300
---3
4. Mescolare e incubare 5 min. a 37°C .
5. Leggere le Assorbanze (A1) dei campioni e del calibratore.
6. Pipettare:
R2 (µL )
Bianco
100
Calibratore
100
Campione
100
REAGENTI
N,N-bis(2-idrossietil)-2aminoetanosulfonico acido pH 6.6
N-(2-idrossi-3-sulfopropil)-3,5dimetossianilina (HDAOS)
Colesterolo Esterasi
Colesterolo ossidasi
Catalasi
Ascorbico ossidasi
R1
R2
HDLc/ LDLc CAL
N,N-bis(2-idrossietil)-2aminoetanosulfonico acido pH 7.0
4 – Amminoantipirinea(4-AP)
Perossidasi
Siero umano liofilo
7. Mescolare ed incubare 5 minuti a 37°C.
8. Leggere le Assorbanze (A2) dei campioni e del calibratore contro
il bianco.
9. Calcolare gli incrementi di assorbanza ∆A= A2 – A1.
100 mM
0.7 mM
≥ 800 U/L
≥ 500 U/L
≥ 300 KU/L
≥ 3000 U/L
CALCOLI
(∆A) camp. x conc. Cal. = mg/dL HDLc nel campione
(∆A) cal.
100 mM
4 mM
≥ 3500 U/L
Fattore di conversione: mg/dL x 0.0259=mmol/L.
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le
performance del procedimento.
Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare
lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi.
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di
Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano
nei limiti di tollerabilità.
PRECAUZIONI
Cal. HDLc/LDLc
Componenti di origine umana,sono stati testati e trovati negativi per
la presenza di HbsAg,HCV e anticorpi anti-HIV ( ½ ). Comunque
manipolare come materiale potenzialmente infettivo.
PREPARAZIONE
-R1 e R2 sono pronti all’uso.
-CAL. HDLc/LDLc:
Sciogliere ( )con 1 ml di acqua distillata.
Tappare e mescolare delicatamente per sciogliere completamente il
contenuto.
VALORI DI RIFERIMENTO
Rischio basso
Rischio normale
Rischio alto
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C e se si evitano
contaminazioni durante l’uso. Non congelare.
Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
R1 e R2:una volta aperti sono stabili 8 settimane a 2-8°C.
Cal.HDLc/LDLc:una volta ricostituito è stabile 1 settimana a 2-8°C o
5 settimane a –20°C..
Segnali di deterioramento dei reagenti:
-presenza di particelle e torbidità.
Uomini
> 50 mg/dL
35 – 50 mg/dL
< 35 mg/dL
Donne
> 60 mg/dL
45 – 60 mg/dL
< 45 mg/dL
Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe stabilire
un proprio intervallo di riferimento.
CARATTERISTICHE DEL METODO
1. Range di misura: dal limite di detenzione di 2.5 mg/dL al limite
di linearità di 200 mg/dL. Se i valori ottenuti sono superiori al
limite di linearità,diluire il campione 1/2 con NaCl 9 g/L e
moltiplicare il risultato per 2.
MATERIALE ADDIZIONALE
-Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 600 nm.
1
Rev. 0 Ed. 2011
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it
Precisione:
Intra-assay
Media(mg/dL) 37.07 57.93
SD
0.45
0.88
CV (%)
1.20
1.53
Inter-assay
37.7 58.1
0.35 0.51
1.53 0.88
Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit (y) non
mostrano differenze sistematiche se comparati con altri reagenti in
commercio (x).
I risultati ottenuti usando 50 campioni danno i seguenti risultati:
Coefficiente di correlazione ( r ): 0.994.
Equazione della regressione: y= 0.93x + 0.333.
I risultati delle caratteristiche dipendono dall’analizzatore utilizzato.
INTERFERENZE
Emoglobina fino a 1000 mg/dL, Bilirubina T. e D. fino a 60 mg/dL o
lipemia fino a 1800 mg/dL non danno interferenze.
Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la
determinazione del Colesterolo HDL è stato riportato in letteratura da
Young e al.
NOTE
Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più diffusi
analizzatori automatici.
BIBLIOGRAFIA
1.Naito H.K HDL Cholesterol.Kaplan A et al. Clin.Chem.The C.V. Mosby
Co.St.Louis.Toronto.Princeton 1984: 1207-1213 and 437.
2.US National Cholesterol Education Program of the National Institute of
Health.
th
3.Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4 ed. AACC Press, 1995
4.Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001.
5.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3rd ed. AACC 1999.
6.Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995.
CONFEZIONE COLESTEROLO HDL
Ref.:
CH-78
Cont
: 60 + 20 mL
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
Consultare le istruzioni dell’uso
Numero di lotto
Conservare a 2-8°C
Cont
Contenuto
Fabbricante
Utilizzare entro
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
Numero di catalogo
2
Rev. 0 Ed. 2011
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it