TGS TA CMV IgG Avidity

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TGS TA CMV IgG Avidity
ISTRUZIONI
PER L’USO
IT Italiano
50
0459
FINALITA’ D’USO
Il test TGS TA CMV IgG Avidity è un test immunologico chemiluminescente (CLIA) per la determinazione,
con strumentazione TGS TA Analyser o IDS-iSYS Multi-Discipline Automated System dell’indice dell’avidità
delle IgG anti Citomegalovirus umano (CMV) in campioni di siero e plasma (EDTA o Sodio Citrato).
La possibilità di distinguere gli anticorpi ad alta avidità da quelli a bassa avidità consente di avere
informazioni cliniche differenti. Questo dosaggio viene impiegato come ausilio diagnostico nella valutazione
dello stato immunitario del paziente riferito all’infezione da CMV.
Questo prodotto deve essere utilizzato in stretta osservanza alle istruzioni riportate nel presente documento
da utilizzatori professionali.
ATTENZIONE: Qualunque decisione medica non può essere basata sul risultato di questo solo test, ma va
fondata sulla valutazione dell’insieme di tutti i dati clinici e di laboratorio disponibili.
SIGNIFICATO CLINICO
Il Citomegalovirus umano (CMV) è un virus appartenente alla famiglia Herpesviridae ed è anche conosciuto
come herpesvirus-5 umano (CMV-5). Sebbene il CMV, dopo l’infezione primaria, possa permanere in forma
1
latente in diversi tessuti dell’organismo, è più frequentemente presente nell’epitelio delle ghiandole salivari .
L’infezione da CMV è tipicamente asintomatica nella popolazione immunocompetente, ma può costituire un
grave rischio di vita nei pazienti con AIDS ( sindrome da immunodeficienza acquisita ), pazienti soggetti a
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trapianto e neonati infetti .
Dopo l’infezione primaria, il virus non viene eliminato e rimane persistente in forma latente nell’organismo e
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può riattivarsi quando i sistemi di difesa si indeboliscono.
L’infezione da CMV è presente in tutte le aree geografiche del mondo. La percentuale di sieropositività è più
elevata nelle donne, nelle persone anziane e prevalentemente nei paesi ad alta densità di popolazione e
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basso livello socioeconomico. La sieroprevalenza mondiale nella popolazione adulta varia dal 40 al 90% .
Come per altri virus erpetici l’infezione primaria da CMV può essere seguita da un’infezione cronica o da uno
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stato latente, da cui il virus può essere riattivato .
CMV è l’agente più comune delle infezioni virali intrauterine ed infetta lo 0,5-2,0% di tutti i neonati nei diversi
paesi del mondo
6,7,8
. Nelle donne in gravidanza il poter distinguere un’infezione primaria da una reinfezione
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è molto importante, poiché l’infezione primaria è estremamente pericolosa per il feto . Questo vale anche per
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i pazienti immuno-compromessi, in cui l’infezione primaria è spesso accompagnata da sintomi, mentre è
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abitualmente asintomatica nella reinfezione .
La diagnosi sierologica dell’infezione primaria da CMV si basa sul rilevamento degli anticorpi specifici di
classe IgM, sulla dimostrazione della sieroconversione degli anticorpi specifici di classe IgG, o
sull’incremento della concentrazione degli anticorpi specifici di classe IgG. Poiché sia la sieroconversione
della classe IgG che il relativo incremento di concentrazione sono raramente dimostrabili, il rilevamento delle
IgM specifiche è il dosaggio sierologico ritenuto più affidabile per diagnosticare un’infezione primaria.
Comunque in alcune pazienti le IgM possono essere rilevate anche molti mesi dopo l’avvenuta infezione ed
inoltre possono essere prodotte in seguito a reinfezioni o reattivazioni
11,12
. Inoltre risultati falsi positivi
possono essere causati da infezioni da altri virus erpetici ed in alcuni casi in pazienti con patologie
13,14
autoimmuni
.
Vale la pena sottolineare che oltre al dosaggio delle IgG ed IgM, la determinazione dell’avidità della classe
IgG ha un ruolo importante nel differenziare la fase primaria dell’infezione dalla fase pregressa
15
e quindi
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essere estremamente utile nell’indagine di sospette infezione da CMV nella donna in gravidanza .
PRINCIPIO DEL METODO
Il kit TGS TA CMV IgG Avidity per la determinazione dell’indice di avidità delle IgG specifiche anti
citomegalovirus utilizza un metodo immunologico indiretto a due step basato sul principio della
chemiluminescenza. Il test può essere eseguito solo su campioni preventivamente dosati per verificare la
presenza di IgG anti CMV.
L’antigene specifico è utilizzato per rivestire le particelle magnetiche (fase solida) ed un anticorpo anti-IgG
umane è marcato con un derivato dell’estere di acridinio (coniugato).
Ogni campione è testato in due cuvette diverse: una (a) di riferimento e una seconda (b) con tampone in
grado di dissociare il legame Antigene (Ag)-Anticorpo (Ab) qualora l’avidità dell’Anticorpo IgG per l’antigene
CMV sia bassa. Durante la prima incubazione gli anticorpi specifici presenti nel campione, nei calibratori o
nei controlli si legano alla fase solida. Nella seconda cuvetta (b), al termine della prima incubazione, una
seconda incubazione è eseguita con un tampone in grado di dissociare il legame fra l’Ag delle particelle
magnetiche e gli Anticorpi IgG del campione qualora siano presenti prevalentemente Ab a bassa avidità.
Durante l’ultima incubazione il coniugato reagisce con gli anticorpi anti citomegalovirus IgG sequestrati dalla
fase solida.
Dopo ciascuna incubazione il materiale non legato alla fase solida è rimosso mediante aspirazione e
susseguente lavaggio.
La quantità di coniugato marcato rimasto legato alla fase solida viene valutata mediante attivazione della
reazione di chemiluminescenza e misura del segnale luminoso. Il segnale generato, espresso in unità
relative di luce (RLU, Relative Light Unit), è indicativo della concentrazione degli anticorpi specifici presenti
nel campione, nei calibratori e nei controlli.
Il rapporto fra la concentrazione degli anticorpi della seconda cuvetta (b) (campione trattato – IgG residue) e
la concentrazione degli anticorpi della cuvetta di riferimento (a) (campione non trattato – IgG totali) fornisce
l’indice che esprime l’avidità degli anticorpi IgG anti CMV presenti nel campione.
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AUTOMAZIONE
Lo strumento TGS TA Analyser esegue in automatico tutte le operazioni previste dal protocollo di dosaggio:
aggiunta nel contenitore di reazione dei campioni, calibratori, controlli, particelle magnetiche, coniugato e
soluzioni di attivazione della chemiluminescenza; separazione magnetica e lavaggio delle particelle; misura
della luce emessa.
Il sistema calcola i risultati del dosaggio per i campioni ed i controlli mediante curva di calibrazione
memorizzata e stampa un rapporto che include tutte le informazioni relative al dosaggio ed al paziente.
MATERIALI E REAGENTI
Materiali e reagenti forniti
REAG
1
MP
2,5 mL
Particelle magnetiche rivestite con antigene CMV inattivato (ceppo AD 169) in Tampone Fosfato contenente
proteine stabilizzanti, Pro-Clin 300 e sodio azide (< 0.1 %) come conservanti.
REAG
2
CONJ
25 mL
Anticorpo monoclonale di topo anti-IgG umane marcato con un derivato dell’estere di acridinio (coniugato), in
Tampone Fosfato contenente proteine stabilizzanti e sodio azide (< 0.1 %) come conservante.
REAG
3
DIL
25 mL
Soluzione Diluente Campioni: Tampone Fosfato contenente sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un
colorante arancione, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO4 come conservanti.
REAG
4
BUF AV
15 mL
AV
Soluzione Tampone : Tampone Borato contenente un agente dissociante e Sodio Azide come conservante.
REAG
5
CAL A
1,6 mL
Siero umano con bassa concentrazione di anticorpi anti-CMV IgG in Tampone Fosfato contenente
sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un colorante blu inerte, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO4 come
conservanti.
REAG
6
CAL B
1,6 mL
Siero umano con elevata concentrazione di anticorpi anti-CMV IgG in Tampone Fosfato contenente
sieroalbumina bovina, un tensioattivo, un colorante blu inerte, Pro-Clin 300 e Gentamicina SO4 come
conservanti.
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Tutti i reagenti sono pronti per l’uso.
I reagenti 1, 2, 3 e 4 sono assemblati in un unico insieme che costituisce la cartuccia reagenti.
Le concentrazioni dei Calibratori sono espresse in AU/mL (Unità Arbitrarie), tarate contro uno standard di
riferimento interno. I valori delle concentrazioni, specifici per lotto di prodotto, sono registrati nel DATA DISK
inserito nel kit.
DATA DISK
Mini-DVD contenente le informazioni riguardanti tutti i prodotti della Linea TGS TA (Reagenti, Calibratori,
Sieri di controllo) aggiornati all’ultimo lotto produttivo con l’esclusione dei prodotti scaduti alla data di
compilazione del nuovo DATA DISK.
E’ sufficiente conservare il DATA DISK con il numero di lotto più elevato per mantenere aggiornate le
informazioni richieste per il corretto funzionamento del sistema.
Materiali e reagenti richiesti ma non forniti nel kit
(1)
-
TGS TA Analyzer 120
-
IDS-iSYS Cuvette Cube
Cod. No. TGS00001
(1)
Cod. No. IS-CC1000
Confezione da 960 cuvette.
-
IDS-iSYS System Liquid
(2)
Cod. No. IS-CS1000
1 bottiglia da 5 litri di soluzione, pronta all’uso.
-
IDS-iSYS Wash Solution
(2)
Cod. No. IS-CW1000
1 bottiglia da 10 litri di soluzione, pronta all’uso.
-
IDS-iSYS Trigger Set
(2)
Cod. No. IS-CT1000
1 flacone da 250 mL di Trigger A (soluzione di preattivazione)
1 flacone da 250 mL di Trigger B (soluzione di attivazione)
-
TGS TA D-SORB Solution
Cod. No. YC500009
Confezione da 2 bottiglie da 1 litro di soluzione pronta per l’uso.
-
IDS-iSYS Cartridge Checking System
-
TGS TA ImmunoCleaner
(2)
Cod. No. IS-601000
Cod. No. YC500012
6 flaconi da 27 mL ciascuno
-
TGS TA Top Cap Set
Cod. No. YC500010
300 tappi superiori rossi per la chiusura dei contenitori dei calibratori dopo il primo utilizzo.
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Fabbricati da IDS France SAS, 42 rue Stéphane Mazeau, 21320 Pouilly en Auxois, France e distribuiti da
Technogenetics Srl.
(2)
Fabbricati da IDS SA, 101-103 rue Ernest Solvay, 4000 Liège, Belgique e distribuiti da Technogenetics
Srl.
Altri Reagenti Raccomandati
TGS TA CMV AVIDITY Control Set
Cod. No. YB500043
3 fiale da 1,0 mL di siero umano a bassa-media avidità e 3 fiale da 1,0 mL di siero ad alta avidità di anticorpi
anti-CMV IgG.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
I reagenti forniti nel kit TGS TA CMV IgG sono solo per uso diagnostico in vitro e non per uso in vivo in
uomini o animali.
Questo prodotto deve essere utilizzato in stretta osservanza alle istruzioni riportate nel presente documento
da utilizzatori professionali.
Technogenetics non può essere ritenuta responsabile di perdite o danni generati da un uso non conforme
alle istruzioni fornite.
Precauzioni di sicurezza
Questo prodotto contiene materiale di origine animale e pertanto deve essere manipolato come se
contenesse agenti infettanti.
Questo prodotto contiene componenti di origine umana. Tutte le unità di siero o plasma utilizzate per la
fabbricazione dei reagenti di questo kit sono state analizzate con metodi FDA approvati e trovate non
reattive per la presenza di HBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 ed anti-HIV2.
Tuttavia, poiché nessun metodo di analisi è in grado di garantire l’assenza di agenti patogeni, tutto il
materiale di origine umana deve essere considerato potenzialmente infetto e manipolato come tale.
In caso di imballaggio danneggiato con fuoriuscita dei reagenti provvedere alla decontaminazione dell’area
interessata con una soluzione diluita di Ipoclorito di Sodio dopo essersi protetti con idonei dispositivi di
protezione individuale (camice, guanti, occhiali).
Provvedere allo smaltimento del materiale utilizzato per la pulizia e dei rifiuti di imballaggio coinvolti nella
fuoriuscita, in base alle norme nazionali per lo smaltimento dei rifiuti potenzialmente infetti.
In caso di imballaggio danneggiato con fuoriuscita di liquido, i reagenti non devono essere utilizzati per
l’esecuzione dei dosaggi.
Alcuni reagenti contengono sodio azide come conservante. Poiché la sodio azide può reagire con piombo,
rame e ottone piombato formando azidi esplosive nelle tubature, si raccomanda di non eliminare reagenti o
rifiuti negli scarichi ma di seguire le norme nazionali in materia di smaltimento rifiuti potenzialmente
pericolosi.
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Precauzioni operative
Per ottenere risultati affidabili è necessario attenersi strettamente alle presenti Istruzioni per l’uso e seguire
scrupolosamente quanto indicato nel manuale operativo dello strumento.
I reagenti forniti nel kit devono essere utilizzati esclusivamente con il sistema TGS TA Analyzer.
I componenti della cartuccia reagenti non possono essere rimossi dalla cartuccia e riassemblati.
Non usare il kit oltre la data di scadenza.
PREPARAZIONE DEI REAGENTI
I reagenti forniti nel kit sono tutti pronti per l’uso.
CONSERVAZIONE E STABILITA’ DEI REAGENTI
Conservare i reagenti forniti nel kit a 2-8 °C in posizione verticale ed al buio.
In queste condizioni la cartuccia reagenti ed i calibratori non aperti sono stabili sino alla data di scadenza.
La cartuccia reagenti dopo apertura può essere utilizzata per 60 giorni se conservata in frigorifero a 2-8 °C
oppure a bordo macchina.
I calibratori dopo apertura possono essere utilizzati per 60 giorni se conservati in frigorifero a 2-8 °C e se la
permanenza a bordo non supera le 6 ore per seduta.
Non congelare i reagenti ed i calibratori.
PREPARAZIONE E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI
Il dosaggio deve essere eseguito su campioni umani di siero, plasma con EDTA o Sodio Citrato.
Si sconsiglia l’uso di campioni lipemici, emolizzati e torbidi.
Se il dosaggio viene eseguito dopo più di 8 ore, separare il siero dal coagulo, dai globuli rossi e dalle
provette di separazione con gel.
Prima di essere analizzati i campioni possono essere conservati in frigorifero a 2-8 °C per 7 giorni al
massimo.
Se il dosaggio viene eseguito dopo più di 7 giorni, conservare i campioni congelati (< - 20 °C).
Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti.
PROCEDIMENTO OPERATIVO
Per ottenere prestazioni analitiche affidabili attenersi scrupolosamente alle istruzioni riportate nel manuale
operativo dello strumento.
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Caricamento dei reagenti
Tutti i reagenti forniti nel kit sono pronti per l’uso.
Prima di inserire la cartuccia reagenti nel sistema, il contenitore delle particelle magnetiche deve essere
agitato per rotazione orizzontalmente in modo da favorire la risospensione delle particelle. Eseguire
l’operazione evitando la formazione di schiuma.
Posizionare la cartuccia reagenti nell’area reagenti dello strumento utilizzando l’apposita guida e lasciare in
agitazione per almeno 1 ora prima dell’uso.
Il posizionamento della cartuccia reagenti determina contemporaneamente la lettura del codice a barre
identificativo. In caso di danneggiamento dell’etichetta della cartuccia o in caso di mancata lettura, i dati
identificativi della cartuccia reagenti possono essere inseriti manualmente.
Lo strumento mantiene automaticamente in agitazione continua le particelle magnetiche.
Se la cartuccia reagenti viene rimossa dallo strumento, conservarla verticalmente al buio a 2-8 °C.
Caricamento dei calibratori
I calibratori TGS TA sono pronti per l’uso. Lasciare i calibratori a temperatura ambiente per 10 minuti ed
agitare delicatamente il contenuto, manualmente o mediante vortex, evitando la formazione di schiuma.
Nel caso i calibratori fossero utilizzati per la prima volta, eliminare il sigillo di garanzia ed il tappo bianco di
chiusura prima del loro inserimento sullo strumento.
Nel caso i calibratori fossero già stati utilizzati, il contenitore sarà provvisto del tappo superiore (tappo rosso)
senza il sigillo di garanzia. Eliminare il tappo di chiusura rosso prima del loro inserimento sullo strumento.
Inserire nello strumento i calibratori nell’area campioni; per la loro identificazione sullo strumento consultare il
manuale d’uso dello strumento. I dati del bar code devono essere inseriti manualmente in caso di
danneggiamento dell’etichetta o in caso di mancata lettura.
I valori della concentrazione degli anticorpi IgG anti-CMV presente nei calibratori sono registrati nel DATA
DISK ed automaticamente trasferiti nell’analizzatore.
Al termine della seduta i contenitori dei calibratori devono essere chiusi con gli appositi tappi superiori (tappi
rossi) e trasferiti a 2-8 °C sino al loro successivo impiego.
I calibratori possono essere utilizzati per un massimo di quattro volte.
Caricamento dei controlli
Inserire i controlli nell’area campioni dello strumento. Per la loro identificazione sullo strumento consultare il
manuale d’uso dello strumento. In caso di mancanza del bar code sul controllo o in caso di mancata lettura, i
dati identificativi del controllo possono essere inseriti manualmente. Qualora siano utilizzati i Controlli TGS
TA, consultare le relative istruzioni d’uso. I valori di Indice di Avidità degli anticorpi IgG anti-CMV presente
nei controlli TGS TA sono registrati nel DATA DISK ed automaticamente trasferiti nell’analizzatore.
Selezionare per ogni controllo i parametri richiesti.
Caricamento dei campioni
Inserire i campioni nello strumento, nell’area campioni; per la loro identificazione sullo strumento consultare il
manuale d’uso dello strumento. In caso di mancanza del bar code sul campione o in caso di mancata lettura,
i dati identificativi del campione possono essere inseriti manualmente.
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Selezionare per ogni campione i parametri richiesti.
Sulla base della concentrazione di CMV IgG del campione, sono disponibili due protocolli selezionabili in
fase di impostazione di parametro richiesto (analyte), secondo il presente schema:
CMV IgG concentrazione compresa fra 10 e 300 AU/mL
CMV Avidity IgG 10-300
CMV IgG concentrazione > 300 AU/mL
CMV Avidity IgG>300
Calibrazione
Lo strumento TGS TA Analyzer utilizza una curva di calibrazione memorizzata (master curve), generata dal
produttore per ogni lotto di cartuccia reagenti.
I parametri delle “master curve”, unitamente ai valori delle concentrazioni dei calibratori, sono memorizzati
nel DATA DISK e trasferiti nel database dello strumento.
I calibratori A e B sono utilizzati per ricalibrare la “master curve” in funzione sia dello strumento utilizzato che
dei reagenti a bordo.
Per eseguire la ricalibrazione analizzare in triplicato i due calibratori A e B ed in singolo i controlli. I valori di
concentrazione ottenuti con i controlli permettono di validare la nuova calibrazione.
Una volta che la ricalibrazione della “master curve” sia stata accettata e memorizzata, tutti i campioni
successivi possono essere analizzati senza ulteriore calibrazione, tranne nei seguenti casi:
-
quando è caricata a bordo dello strumento una cartuccia reagenti con un nuovo lotto;
-
quando i valori dei controlli non rientrano nell’intervallo di accettabilità;
-
quando è eseguita la procedura di manutenzione dello strumento;
-
quando è scaduta la validità della “master curve” ricalibrata.
La validità della “master curve” ricalibrata per il kit TGS TA CMV IgG Avidity è di 21 giorni.
La gestione della ricalibrazione è attuata in automatico dallo strumento.
Dosaggio
Premere il tasto di avvio.
1. Il sistema aspira 100 µL di Diluente Campioni, 20 µL di Particelle Magnetiche, 100 µL di Diluente
Campioni e 10 µL di campione o controllo (per i calibratori il siero positivo è fornito prediluito con il
Diluente Campioni ed il volume prelevato è di 110 µL). Le soluzioni e la sospensione aspirate sono
dispensate nella cuvetta di reazione.
2. La cuvetta di reazione è incubata nel rotore a 37 °C per 10 minuti.
3. Dopo questa fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate.
a. Solo nella seconda cuvetta (b) di ogni campione vengono dispensati 200 µL del Buffer
Avidity e la cuvetta è incubata nel rotore a 37°C per 10 minuti
b.
Dopo questa fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate.
4. Nella cuvetta sia (a) che (b) vengono dispensati 200 µL di coniugato.
5. La cuvetta di reazione è incubata nel rotore a 37 °C per 10 minuti.
6. Dopo questa ultima fase di incubazione, le particelle magnetiche sono separate e lavate e la cuvetta
viene trasferita nella camera di lettura.
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7. La quantità di coniugato legato alla fase solida, espressa in RLU, è direttamente proporzionale alla
concentrazione di IgG anti-CMV presente nel campione.
8. Le risposte ottenute sono interpolate sulla curva di taratura e trasformate in concentrazioni e Indici di
Avidità.
CONTROLLO QUALITA’
Per assicurare la validità del dosaggio, sieri di controllo a differenti indici di avidità (almeno un siero con
avidità medio-bassa e uno con avidità alta) devono essere misurati ogni giorno in cui si esegue il dosaggio.
Se il proprio laboratorio richiede, per la verifica dei risultati del dosaggio, un uso più frequente o un numero
più elevato di controlli, seguire le procedure del controllo qualità ivi stabilite.
Se vengono utilizzati i sieri di controllo TGS TA, i valori medi attesi ed i limiti di accettabilità sono quelli
riportati nel DATA DISK presente anche nella confezione dei controlli.
Qualora venissero utilizzati sieri di controllo diversi, è necessario, prima del loro impiego, definire i valori
attesi con reagenti e sistema TGS TA.
Qualora il valore dei controlli non rientri nel range di accettabilità specificato, i relativi risultati del dosaggio
non sono validi ed i rispettivi campioni devono essere rianalizzati.
In questo caso è necessario eseguire prima della ripetizione del dosaggio una procedura di ricalibrazione.
CALCOLO ED INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Calcolo dei risultati
La concentrazione degli anticorpi IgG anti-CMV presente nei campioni in esame è calcolata
automaticamente dal sistema. I valori possono essere visualizzati mediante lettura sul video o attraverso
stampa.
Il calcolo della concentrazione di analita nel campione avviene attraverso lettura della risposta ottenuta per
ogni campione su una curva di calibrazione elaborata mediante un sistema di “fitting” logistico a quattro
parametri (4PL, Y ponderato), corretta periodicamente in funzione delle risposte ottenute nel dosaggio dei
calibratori.
I valori di avidità sono espressi in indice di avidità (Index) e calcolati direttamente dallo strumento.
Per informazioni dettagliate su come il sistema calcola i risultati, consultare il manuale operativo del sistema.
Interpretazione dei risultati
I valori inferiori a 0.0 UA/mL sono valori estrapolati ,compare il messaggio “OMR-“e/o ORA e sono riportati
con valore “uguale a 0.0 UA/mL”. In questa situazione non è possibile ricavare l’indice di Avidità.
I valori superiori a 400 UA/mL hanno il messaggio “OMR+” e/o ORA e possono essere ritestati dopo
opportuna diluizione.
L’indice di Avidità calcolato dallo strumento è espresso in Index.
I risultati dei campioni possono essere interpretati nel seguente modo:
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(Index) < 0,15
Interpretazione
Il campione è da considerare con IgG anti-CMV a bassa avidità
>0,15÷0,20
Il campione è da considerare con IgG anti-CMV a media avidità
> 0,20
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Il campione è da considerare con IgG anti-CMV ad alta avidità
I valori sopra riportati sono da considerare solo valori suggeriti. Ciascun laboratorio deve stabilire i propri
intervalli di riferimento.
LIMITI DEL DOSAGGIO
Per scopi diagnostici, i risultati ottenuti con il kit TGS TA CMV IgG Avidity ed il sistema TGS TA Analyzer
devono essere utilizzati unitamente agli altri dati clinici e di laboratorio a disposizione del medico.
La contaminazione batterica dei campioni e l’inattivazione al calore possono influenzare il risultato del
dosaggio.
Gli anticorpi eterofili presenti nei campioni di siero umano possono reagire con i reagenti a base di
immunoglobuline, causando interferenze nei dosaggi immunologici in vitro. Questi campioni possono dar
luogo a valori anomali se analizzati con il kit TGS TA CMV IgG Avidity.
SPECIFICITÀ E SENSIBILITÀ DIAGNOSTICA
Utilizzando i test TGS TA CMV IgG, TGS TA CMV IgM e TGS TA CMV IgG Avidity è possibile valutare lo
stato immunitario del paziente riguardo l’infezione da Citomegalovirus.
Nella seguente tabella sono riportati i profili sierologici dei tre test CMV IgG, CMV IgM e CMV IgG Avidity
che possono essere rilevati durante la fase infettiva e la relativa interpretazione rispetto all’esposizione al
parassita.
IgG anti-CMV
IgM anti-CMV
IgG Avidity anti- CMV
°
Interpretazione
(test di 2 livello)
Negativo
Negativo
--
Non immune (suscettibile all’infezione)
Negativo
Positivo
--
Sospetta infezione primaria in atto
Recente Infezione primaria
Positivo
Positivo
Bassa Avidità
(presumibile infezione primaria
acquisita nei 3 mesi precedenti il
prelievo del campione)
Infezione recente o pregressa con
Positivo
Positivo
Alta Avidità
persistenza delle IgM (presumibile
infezione passata acquisita più di 3
mesi prima del prelievo del campione)
Positivo
Negativo
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Alta Avidità
Infezione pregressa
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Utilizzando i test TGS TA CMV IgG, TGS TA CMV IgM e TGS TA CMV IgG Avidity sono state valutate la
specificità e sensibilità diagnostica nella seguente popolazione di campioni selezionati, esaminati con diversi
metodi e classificati in base alla regola del consenso generale:
- 117 campioni di altrettanti pazienti non immuni
- 86 campioni da 25 pazienti infetti da CMV in monitoraggio e follow up. Di questi 86 campioni, 60 sono stati
prelevati entro 3 mesi dalla comparsa dei sintomi e sono stati utilizzati per valutare il grado di Avidità delle
IgG, mentre 45 campioni prelevati entro due mesi dalla comparsa dei sintomi sono stati impiegati per
valutare la sensibilità clinica delle IgM.
- 30 campioni da altrettanti pazienti infettati da più di 3 mesi dalla comparsa dei sintomi.
Seguendo l’interpretazione sopra riportata è stato possibile calcolare la specificità e sensibilità diagnostica
relativamente ai gruppi valutati.
Dei 117 pazienti non immuni, 114 avevano valori di IgG inferiori al cut off del metodo TGS TA CMV IgG e
116 avevano IgM inferiori al cut-off del metodo TGS TA CMV IgM. La specificità diagnostica dei metodi per
IgG e IgM in pazienti non immuni è stata del 97.4% per IgG (Intervallo di Confidenza al 95%: 92.1-99.3 %) e
99.1% per IgM (Intervallo di Confidenza al 95%: 94.6-100.0 %).
Dei 116 campioni (86 e 30) di pazienti infettati da CMV in monitoraggio e follow-up, il metodo TGS TA CMV
IgG ha mostrato 116 risultati positivi, con sensibilità del 100.0% (Intervallo di Confidenza al 95%: 96.0%100.0 %).
Dei 45 campioni di pazienti con infezione in atto prelevati entro 60 giorni dai sintomi, il metodo TGS TA CMV
IgM ha mostrato 44 risultati positivi e 1 negativo con sensibilità diagnostica del 97.8% (Intervallo di
Confidenza al 95%: 86.8-99.9%).
Con il metodo TGS TA CMV IgG Avidity, sono stati analizzati 60 campioni di pazienti con la comparsa dei
sintomi nei tre mesi precedenti il prelievo, mostrando 57 campioni a bassa avidità, 2 a moderata e 1 ad alta
avidità.
Dei 30 campioni di pazienti con la comparsa dei sintomi da più di tre mesi dal prelievo, tutti erano positivi per
IgG mostrando una sensibilità clinica del 100%, 1 paziente era positivo anche per IgM e tutti i campioni
presentavano alta avidità con il metodo TGS TA CMV IgG Avidity.
PRESTAZIONI
Avvertenza: i dati presentati non rappresentano le specifiche di funzionamento del kit, ma costituiscono
evidenza sperimentale di come il kit funzioni entro tali specifiche nel modo previsto dal produttore.
Precisione e Riproducibilità
La precisione e riproducibilità del kit TGS TA CMV IgG Avidity sono state valutate impiegando un protocollo
basato sulle linee guida del documento EP5-A2 del Clinical and Laboratory Standards (CLSI).
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TGS TA CMV IgG Avidity
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La precisione è stata calcolata analizzando i risultati di 20 replicati di tre sieri (ad alta avidità di IgG antiCMV) eseguiti con due diversi lotti di reagenti nella stessa seduta sperimentale.
In Tabella si riportano i risultati ottenuti con i 3 sieri.
Campione
1
2
3
Reagenti
Lot. no.
Media
(Index)
SD
(Index)
CV %
2
3
2
3
2
3
0,488
0,472
0,512
0,507
0,593
0,619
0,046
0,052
0,082
0,057
0,080
0,059
9,4
11,0
15,9
11,2
13,6
9,5
La riproducibilità è stata calcolata analizzando i risultati della determinazione di quattro sieri (ad alta avidità
di IgG anti-CMV) eseguita in 17 sedute diverse, con un lotto di reagenti.
In Tabella si riportano i risultati ottenuti con i 4 sieri.
Campione
Media
(Index)
SD
(Index)
CV %
CMG-P1
0,459
0,044
9,6
CMG-P2
0,435
0,038
8,8
CMG-P3
0,486
0,047
9,7
CMG-P4
0,573
0,044
7,7
Specificità Analitica: Interferenze
Uno studio basato sulle linee guida del documento EP7-A2 del CLSI ha dimostrato che le prestazioni del
dosaggio non sono influenzate dalla presenza nel campione delle sostanze potenzialmente interferenti
elencate nella seguente tabella, sino alla concentrazione sperimentata.
Sostanze Potenzialmente
Interferenti
Bilirubina libera
Bilirubina coniugata
Emoglobina
Trigliceridi
Massima concentrazione sperimentata
20
20
1000
3000
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
L’uso di campioni lipemici, emolizzati o torbidi viene comunque sconsigliato.
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Sensibilità e Specificità Relative
L’Index di Avidità delle IgG anti-CMV è stato determinato utilizzando il kit TGS TA CMV IgG Avidity ed un
metodo di dosaggio immunochemiluminescente disponibile in commercio in 141 campioni (23 con bassa
avidità e 118 con alta avidità).
11 campioni hanno dato luogo a risultati discordanti tra il dosaggio TGS TA ed il dosaggio disponibile in
commercio.
La concordanza relativa totale è risultata pertanto essere pari al 92,2 % (Intervallo di Confidenza al 95%:
86,1 – 95,8%) (130/141).
La concordanza relativa nei campioni a bassa avidità è risultata pari al 100,0 % (Intervallo di Confidenza al
95%: %: 82,2 -100,0%) (23/23).
La concordanza relativa nei campioni ad alta avidità è risultata pari al 90,7% (Intervallo di Confidenza al
95%: 83,6 – 95,0 %) (107/118). Degli 11 campioni discordanti, 6 campioni hanno mostrato un’avidità
moderata e 5 campioni una bassa avidità.
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Via Vanvitelli, 4
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