Streptococcus pneumoniae - InterMedical, prodotti diagnostici

Streptococcus pneumoniae
REF C-101 20 tests
Test rapido per la rilevazione qualitativa della capsula parete polisaccaridi (CWPS) nelle urine e nel liquor
Solo per un uso diagnostico in vitro.
DESTINAZIONE D'USO
Il test rapido S. pneumoniae è un test immunologico per la determinazione
qualitativa del polisaccaride della parete capsulare (CWPS) nelle urine e nel liquor
Questo kit è destinato all'uso come ausilio nella diagnosi di Streptococcus
pneumoniae.
SOMMARIO
Streptococcus pneumoniae è un batterio Gram-positivo visibile come organismo
isolato, a coppie o in piccoli catene di batteri. Le principali caratteristiche dello
Streptococcus pneumoniae è la sua capacità di formare una capsula, rendendolo
patogeno. Questa capsula è in gran parte composta da polisaccaridi con sub-unità
glucidiche (CWPS) riconosciuta dagli anticorpi umani, rendendola antigenica.
Streptococcus pneumoniae è la causa più frequente di meningite batterica negli
adulti o bambini. Può anche causare otite moderata o polmonite. La diagnostica
viene generalmente fatta ricercando il batterio nel liquido cerebrospinale o gli
antigeni capsulari solubili nelle urine del paziente. Lo screening di Streptococcus
pneumoniae può rilevare e prevenire polmoniti gravi in una fase iniziale, riducendo
la mortalità.
Il rischio è 30-100 volte più elevata per gli individui affetti da HIV.
PRINCIPIO DEL TEST
Il test di S. pneumoniae si basa su una tecnologia immunocromatografica per
rilevare la parete polisaccaridica della capsula (CWPS) in campioni di urine e CSF.
Una coppia di anticorpi monoclonali anti antigeni CWPS viene utilizzato per la
rilevazione della parete polisaccaridica della capsula (CWPS). Un anticorpo è
immobilizzato sulla membrana di nitrocellulosa a livello della linea di test:
corrisponde all’ anticorpo di cattura. Un altro è marcato con l'oro colloidale per la
successiva rivelazione.
Durante la migrazione del campione, antigeni CWPS, se presenti nel campione,
formeranno complessi antigene-anticorpo con gli anticorpi marcati. Questi
complessi verranno catturati dagli anticorpi di cattura sulla linea del test, formando
una banda di colore viola generata dalle nanoparticelle d'oro.
La presenza di una banda di controllo interno viola nella parte superiore della
membrana indica che il risultato è valido e che la procedura seguita è corretta.
MATERIALE FORNITO
- Dispositivi del test (20 Tests)
- pipette di plastica
- Istruzioni per l'uso
- Flacone controllo positivo
- Flacone con contagocce contenente diluente
Per evitare la contaminazione, non toccare l'area di reazione del dispositivo
Il dispositivo per il test deve rimanere nella confezione sigillata fino al momento
dell'uso
Conservare e trasportare il dispositivo di test sempre a 2-30 °C
Non mescolare i reagenti di lotti diversi. Non scambiare i tappi delle bottiglie di
soluzione.
PRELIEVO E CONSERVAZIONE
Campioni di urina
I campioni devono essere raccolti in contenitori standard. I campioni di urina
possono essere conservati a temperatura ambiente (15-30 °C) per un massimo di
24 ore dal prelievo. In alternativa, i campioni possono essere conservati a 2-8 °C
fino a 14 giorni oppure a -20 °C per periodi più lunghi prima del test.
Se necessario, i campioni di urina devono essere spediti in contenitori a tenuta
stagna a 2-8 °C o congelati. Portare tutti i campioni a temperatura ambiente prima
del test.
Campioni di CSF
Si raccomanda di congelare i campioni di CSF per lo stoccaggio a lungo termine
per evitare la contaminazione o il deterioramento degli antigeni.
Tuttavia, CSF può essere conservato a temperatura ambiente (15-30 °C) fino a 24
ore a 2-8 °C per una settimana. Campioni di CSF possono anche essere congelati
a -20 °C o -80 °C per una conservazione prolungata.
PROCEDURA
Il protocollo qui descritto è convalidato sia nelle urine che nel liquido
cerebrospinale.
1. Portare tutti i componenti del kit e il campione a temperatura ambiente.
2. Omogeneizzare il campione e prendere una frazione di esso con l'aiuto della
pipetta monouso fornita.
3. Dispensare 1 goccia (30 µl) di campione, con la pipetta di plastica in dotazione,
nel pozzetto del campione. Evitare bolle d'aria e schizzi sulla finestra di lettura.
4. Aggiungere immediatamente 3 gocce di diluente.
5. Avviare il timer. Apparirà un liquido violaceo muoversi lungo la membrana.
6. Leggere il risultato dopo 15 minuti. Un segnale positivo forte può comparire
prima di quel momento.
Non interpretare qualsiasi banda del test che appare dopo 20 minuti.
7. Eliminare tutti i componenti utilizzati seguendo la procedura di smaltimento dei
rifiuti.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
- Contenitore di raccolta dei campioni
- Guanti monouso
- Timer
CONSERVAZIONE E STABILITA '
Conservare nell'involucro sigillato a temperatura refrigerata o temperatura ambiente
(2-30ºC). Il test è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione. Il test
deve rimanere nella confezione sigillata fino al momento dell'uso.
PRECAUZIONI
Solo per uso diagnostico professionale in vitro
Solo per uso singolo
Le indicazioni in metodica, devono essere lette e seguite con attenzione
Non usare i componenti dopo la data di scadenza indicata (vedere etichetta sul
sacchetto e scatola)
Non utilizzare il test se il sacchetto è danneggiato
Non mangiare, bere o fumare nell'area in cui vengono manipolati i campioni oi kit
Trattare tutti i campioni come se contenessero agenti infettivi
Osservare le adeguate precauzioni per rischi microbiologici durante tutte le
procedure e le linee guida standard per il corretto smaltimento dei campioni
Quando i campioni sono in fase di sperimentazione, indossare abbigliamento
protettivo: camice da laboratorio, guanti monouso e protezione per gli occhi
Umidità e alta temperatura possono influire negativamente sui risultati
Non utilizzare più la quantità di liquido
Non versare i campioni nella zona di reazione
POSITIVO:
Sono visibili due bande colorate: una banda di controllo che appare nella zona di
reazione C (banda di controllo) e una, anche debole, nella zona di reazione T
(banda del test).
NEGATIVO:
Solo una banda colorata è visibile nella zona di reazione C (banda di controllo).
Nessuna banda appare nella zona di reazione T (banda del test).
NON VALIDO:
Nessuna banda colorata visibile nella zona di controllo, qualunque sia il risultato
nella zona del test.
CONTROLLO DI QUALITÀ
BIBLIOGRAFIA
- Controlli procedurali interni sono inclusi nel test. Una banda colorata che
compare nella zona di controllo (C) assicura che una sufficiente quantità di
campione è stato dispensato e che la procedura è stata seguita correttamente.
1. Ehara N., Fukushima K., Kakeya H., Mukae H., Akamatsu S., Kageyama,A., Saito
A., and Kohno S., A novel method for rapid detection of Streptococcus
pneumoniae antigen in sputum and its application in adult respiratory tract
infections, Journal of Medical Microbiology (2008), 57, 820–826
2. Murdoch, D., Laing R., Mills G., Karalus N., Town G.I., Mirrett S., and Reller B.,
Evaluation of a Rapid Immunochromatographic test for detection of a
Streptococcus pneumonia antigen in urine samples from adults with communityacquired pneumonia, J. Clin. Microbiol. 2001, 39(10):3495.
3. Statens Serum Institut, Testbook en Serotyping, Virulence Factors and Enzymelinked Immunosorbent Assay (ELISA) for measuring Pneumococcal antibodies, 1st
edition April 2013
- Si consiglia, secondo le usuali buone pratiche di laboratorio, l'uso di controlli
positivi e negativi per controllare il corretto funzionamento del test. Un controllo
positivo che controllerà l'intero test è fornito nel kit. I controlli positivi dovrebbero
essere testati una volta per ciascun nuovo kit di test aperto e come altrimenti
richiesto dalle procedure di controllo di qualità standard del laboratorio.
LIMITAZIONI
1. Come per tutti i test diagnostici, il risultato del test deve essere sempre correlato
con i risultati clinici.
2. I risultati del test devono essere interpretati nel contesto epidemiologico, clinico e
terapeutico. Quando sembra indicato, dovrebbero essere considerate altre tecniche
di riferimento.
VALORI ATTESI
Il limite di rilevazione è di 0,25 ng/mL di CWPS (riferimento 3459 da SSI).
CARATTERISTICHE DI PERFORMANCE
Sensibilità e specificità
Uno studio side-by-side è stato fatto per confrontare S. pneumoniae con un altro
test rapido sul mercato. I risultati sono presentati nella seguente tabella:
S.peumoniae
Sensibilità relativa 93%
Specificità relativa 96%
VPP
92%
VPN
97%
Correlazione
95%
Negativo
Positivo
Altro test rapido
Negativo Positivo
113
4
5
56
118
60
[84-98%]
[90-99%]
[82-97%]
[91-99%]
[91-98%]
Studio clinico esterno
32 campioni di CFS sono stati testati da laboratori accademici da Identificazione
tramite coltura cellulare. 13 CFS campioni sono stati testati anche utilizzando un
altro test rapido, un test di agglutinazione e PCR.
Tutti i risultati ottenuti sono stati confrontati con il test rapido S. pneumoniae. I
risultati sono mostrati nelle tabelle sottostanti
Card
Positivo
Negativo
Totale
Coltura batterica
Positivo Negativo Totale
13
2
15
0
17
17
13
19
32
Positivo
Negativo
Totale
Agglutinazione / test rapido
Positivo Negativo Totale
11
0
11
0
2
2
11
2
13
PCR
Card
Positivo
Negativo
Totale
6. Lumin Zhang, Zihai Li, Zhuang Wan, Andrew Kilby, J Michael Kilby and Wei Jiang,
Humoral Immune Responses to Streptococcus pneumoniae in the Setting of HIV-1
Infection, in Vaccine. 2015 Aug 26; 33(36): 4430–4436. Department of
microbiology and immunology, Medical University of South Carolina, Charleston
7. Bles P., de Mast Q., van der Gaast-de Jongh C., Kinabo G., Kibiki G., van de Ven A.
and de Jonge M., Antibiotic resistance of Streptococcus pneumoniae
colonising the nasopharynx of HIV-exposed Tanzanian infants, Tropical
Medicine and International Health, 2015, vol 00 N° 00.
117
61
178
Sensibilità analitica:
Il limite di rilevazione del test di S. pneumoniae è di 0,25 ng/mL di antigene
ricombinante utilizzando il riferimento 3459, SSI.
Nessun effetto gancio è osservata a 10 µg/ml di antigene CWPS ricombinante.
Card
4. AlonsoDeVelasco E. Verheul, A., Verhoef J., and Snippe H., Streptococcus pneumoniae:
Virulence Factors, Pathogenesis, and Vaccines, Eijkman-Winkler Institute of Medical and
Clinical Microbiology, University Hospital, Utrecht, The Netherlands, Microbiological
reviews, Dec. 1995, p. 591–603 Vol. 59, No. 4
5. Clothilde Manzano. Structural and functional characterization of pilus components of
Streptococcus pneumoniae: toward a better understanding of the biogenesis of pili..
Biomolecules. Universit_e Joseph-Fourier - Grenoble I, 2009.
Positivo
Negativo
Totale
11
2
13
0
0
0
11
2
13
La correlazione globale tra i risultati ottenuti con le card in confronto con coltura
batterica, test rapido e test di agglutinazione è del 100% sui campioni disponibili.
Solo il metodo PCR è più sensibile rispetto al test in card.
Interferenza
Albumina (0,68-1,06 g/L) o bilirubina (a 120 o 300 mg/l) non influenza le prestazioni
del test.
Una presenza di 10 ml/ml di sangue non influenza i risultati, ma una presenza di
100 l/mL è in grado di creare risultati falsi negativi sui positivi deboli a causa della
difficoltà di lettura dei risultati con un rumore di fondo rossastro.
Indice dei Simboli
Attenzione, consultare
le istruzioni per l’uso
N°determinazioni
per kit
Fabbricante
Solo per uso
diagnostico
in vitro
Usare entro
Non
riutilizzare
Conservare a 2-30°C
Numero del lotto
Fabbricante
INTERMEDICAL s.r.l.
Via A.Genovesi,13
80010 Villaricca(Na)-ITALY
Streptococcus pneumoniae Rev. 0 05/2016
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