ACUTISi animali esotici

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IZSTO
Istituto Zooprofilattico
Sperimentale del Piemonte,
Liguria e Valle d’Aosta
Il Laboratorio a tutela degli
animali esotici
Pier Luigi Acutis
CENTRO REFERENZA
REGIONALE ANIMALI ESOTICI
IZSTO
Legge Regione Piemonte 18 febbraio
2010, n. 6
Art. 16 : “Al fine di fornire un supporto
tecnicamente e scientificamente qualificato alla
Commissione regionale…, è istituito, presso
l’IZSPLV, il Centro di referenza regionale
Animali Esotici.”
IZSTO
Regolamento di attuazione – art.9
Obiettivi e funzioni prioritarie del C.R.AN.ES.:
assicurare la corretta gestione della riserva genetica degli
animali esotici presenti nel territorio regionale ;
sviluppare metodi per l’identificazione delle specie esotiche e
per la verifica della parentela di animali nati in cattività;
sviluppare metodi per la determinazione del sesso di specie che
non presentano dimorfismo sessuale;
IZSTO
Regolamento di attuazione – art.9
studiare indicatori di benessere nelle specie esotiche;
sviluppare metodi per la diagnosi molecolare di
malattie degli animali esotici;
promuovere progetti di ricerca.
IZSTO
Genetica
CENTRO REFERENZA
IZSTO
La genetica a tutela delle specie esotiche
•Commercio illegale
•Sostituzioni di esemplari
•Falsa dichiarazione di nascita
•Tracciabilità degli individui
IZSTO
Matrici per analisi genetiche
•Sangue
•Saliva
•Peli
•Penne
•Feci
•Tessuti
•Exuvia
IZSTO
Identificazione di specie
Utile per la tutela di specie protette
Analisi DNA mitocondriale (cytb, COI),
la cui sequenza completa è nota per
molti organismi.
Metodo: analisi sequenza cytb o COI e
raffronto sequenze con database
pubblici
IZSTO
Boa constrictor
Agosto 2011: ritrovamento exuvia di circa 1m
di lunghezza e 15 cm di diametro nello spazio
antistante un condominio a Rivoli.
Materiale consegnato alla ASLTO 3/1
Allertata/avvisata la polizia locale,
preoccupazione per le dimensioni del reperto
Quesito: identificazione specie/animale
pericoloso
IZSTO
Determinazione del sesso negli uccelli
Amplificazione del gene Chromo-Helicase-DNA-binding (CHD)
Localizzato su cromosomi sessuali
Maschio ZZ
Femmina ZW
Polimorfismo di lunghezza tra Z e W
IZSTO
BASIC FRAGMENT ANALYSIS PER LA DETERMINAZIONE DEL SESSO NEI VOLATILI
Colussi S., Peletto S., Riina M.V., Zuccon F., Maniaci M.G., Trisorio S., Mignone W., Fornasiero M., Fragassi S.,
Marengo S., Caramelli M., Acutis P.L.
Ordine
Famiglia
Specie (Nome
comune)
N°
campioni
Galliformes
Phasianidae
Gallo, Gallo
forcello,
Pernice
11
Galliformes
Meleagrididae
Tacchino
2
Columbiformes
Columbidae
Piccione
selvatico
1
Accipitriformes
Accipitridae
Aquila,
Poiana,
Nibbio
Falco,
Gheppio
11
Accipitriformes
Falconidae
Specie
(Nome
comune)
Gallo
Gufo
Civetta
2
Barbagianni
Falconiformes
Accipitridae
Sparviero
1
Strigiformes
Strigidae
Gufo, Civetta,
Assiolo,
Allocco
7
Strigiformes
Tytonidae
Barbagianni
3
Psittaciformes
Cacatuidae
Calopsitte
2
Psittaciformes
Psittacidae
Inseparabile
17
Calopsitte
Inseparabile
Femmina
Maschio
345 pb
361 pb
365 pb
373 pb
365 pb
375 pb
362 pb
384 pb
372pb
401 pb
369 pb
399 pb
345 pb
365 pb
365 pb
362 pb
372 pb
369 pb
IZSTO
Identificazione individuale
• Microsatelliti: regioni di DNA costituite da un numero variabile di
unità mono-, di-, tri- o tetra- nucleotidiche ripetute.
Dinucleotide (GT)6
GTGTGTGTGTGT
Trinucleotide (CTG)4
CTGCTGCTGCTG
Tetranucleotide (ACTC)4
ACTCACTCACTCACTC
IZSTO
I microsatelliti sono caratterizzati da polimorfismi di lunghezza: le
differenze tra un allele e l’altro sono determinate dal numero di
unità ripetute
Allele A
Allele B
Individuo 1: 4,4
Individuo 2: 4,3
Individuo 3: 3,3
IZSTO
Identificazione di individuo
Utile per tracciabilità, contro furti e sostituzioni.
Si basa sul confronto di due campioni biologici per verificare la
loro appartenenza allo stesso individuo: tutti gli alleli devono
essere identici.
Campione 1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
209,
255
194,
200
271,
281
132,
132
202,
210
181,
257
129,
129
153,
177
149,
151
112,
140
122,
126
108,
108
180,
184
130,
154
171,
171
Campione 2
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
209,
255
194,
200
271,
281
132,
132
202,
210
181,
257
129,
129
153,
177
149,
151
112,
140
122,
126
108,
108
180,
184
130,
154
171,
171
IZSTO
Analisi di parentela
Gli alleli di ogni microsatellite sono trasmessi dai genitori con trasmissione di
tipo mendeliano.
Per effettuare attribuzione o esclusione di parentela necessario confrontare
l’individuo con il genitore putativo
Presunta madre
PEZ 1
FHC
2054
FHC
2010
PEZ 5
PEZ 20
PEZ 12
PEZ 3
PEZ 6
PEZ 8
FHC
2079
121,
133
153,
153
232,
236
110,
118
173,
173
264,
284
124,
136
180,
184
233,
241
278,
278
Cucciolo
PEZ 1
FHC
2054
FHC
2010
PEZ 5
PEZ 20
PEZ 12
PEZ 3
PEZ 6
PEZ 8
FHC
2079
125,
133
153,
173
228,
232
118,
122
173,
177
264,
264
124,
136
180,
180
229,
233
278,
290
IZSTO
Tartarughe: T. h. hermanni; T. h. boettgeri;
T. marginata; T. hercegovinensis e T. graeca
Pappagalli e Parocchetti: Ara, Amazona,
Anodorhyinchus, Orthopsittaca, ecc
Rettili: serpenti (pitoni, vipere, serpenti d’acqua),
iguanidi, agamidi, gechi, coccodrilli, lucertole
Anfibi: ranidi, salamandre
Insetti : Aracnidi¸ Ixodidi, Dipteri, Lepidopteri
Pipistrelli
Grandi Felidi: ghepardo, leone,
puma, leopardo, tigre.
Ungulati: bovidi, cervidi, giraffidi, elefantidi,
rinoncerontidi, ippopotamo, camelidi, equidi.
Pesci diverse specie
Mammiferi numerose specie
IZSTO
La distribuzione dei singoli loci microsatelliti all'interno del genoma è speciespecifica.
Trasferibilità cross-specie: possibilità di usare microsatelliti studiati per specie
diverse.
In specie appartenenti allo stesso genere con percentuale di successo variabile in
rapporto ai taxa: migliore per uccelli, rettili, mammiferi, pesci e invertebrati
peggiore per gli artropodi.
In generi diversi appartenenti alla stessa famiglia, in questo caso la percentuale
successo è :
> 40% nei mammiferi ,
> 25% nei pesci,
10% negli uccelli
IZSTO
Pappagalli Ara: Identificazione di specie e di individuo
con DNA mitocondriale e microsatelliti
Ara macao
Ara chloroptera
Ara ararauna
Hideaki A. et al.: applicazione del metodo su
penne a scopi forensi e di conservazione
Ara giacinto
IZSTO
Diagnostica molecolare
CENTRO REFERENZA
IZSTO
Spheniscus humboldti
Sospetto diagnostico: morte per infezione
acuta sostenuta da Plasmodium
PCR diagnostica su fegato, rene e milza (Ricklefs et
al., 2005)
Amplificazione di un
frammento di 154bp
DNA mitocondriale
Sequenziamento
Plasmodium relictum
Plasmodium juxanucleare
IZSTO
Phoca vitulina
Meningo-encefalite di probabile
origine virale
PDV: negativo
Indagini in corso per CDV
IZSTO
Febbre catarrale Maligna (MCF)
PCR diagnostica su muco, tamponi, raschiati, sangue, tessuti
(mucosa orale, lingua, milza) (Hussy et al., 2001)
Amplificazione di un frammento di 131bp dell'ORF75 di OvHV-2
IZSTO
Ricerca
CENTRO REFERENZA
IZSTO
Progetto di ricerca corrente 2010
Animali esotici nei giardini zoologici: messa a punto di
un protocollo per la valutazione del benessere e
costituzione di una banca genetica
In collaborazione con S.S. Benessere Animale (IZSPLV),
UNITO, CdR Benessere Animale (IZSLER), Referenti
esotici ASL.
IZSTO
Razionale
Il benessere non può essere valutato semplicemente con la
percezione umana soggettiva
misurazioni oggettive
Per gli zoo al di fuori di programmi di conservazione non si sa
quale sia il grado di inbreeding delle loro popolazioni: le
riproduzioni e gli scambi di animali devono avvenire in modo
oculato e tracciabile.
IZSTO
WP1: valutazione del benessere
Obiettivi:
•Verificare il livello di benessere degli animali
•Identificare i fattori più utili su cui intervenire per
migliorare il benessere degli animali
IZSTO
WP1: valutazione del benessere
Il benessere verrà valutato con uno studio etologico, utilizzando
un approccio multi-zoo.
Lo studio verrà effettuato associando alle misurazioni in campo,
anche un “welfare audit”
Verranno elaborati standard minimi di mantenimento per
singole specie e verrà preparata una check-list da fornire ai
veterinari.
IZSTO
WP2: costituzione banca genetica
Verranno prelevati campioni biologici del maggior
numero di specie presenti
Per le specie in cui i marcatori non sono ancora stati
identificati, verrà messo a punto il metodo zoo-blot
IZSTO
Collaborazioni e ringraziamenti
IZSTO
S.S. Benessere Animale
Gandolfo Barbarino
Andrea Maroni Ponti
Cristina Zacchia
Silvia Gennero
Stefania Bergagna
UNITO
S.S. Genetica
Paola Modesto
Cristina Biolatti
UNIPD
Sandro Mazzariol
Martina Tarantola
ZOO PIEMONTE – Francesco Rocca
Foto: Paolo Caruso
Foto A. Longo
CENTRO REFERENZA

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