BD Bromcresol Purple Lactose Agar

ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-256501.06
Rev.: Nov 2012
BD Bromcresol Purple Lactose Agar
USO PREVISTO
BD Bromcresol Purple Lactose Agar (agar viola al lattosio) è un terreno differenziale, non
selettivo, utilizzato per la conta dei batteri nelle urine. Supporta la crescita dei patogeni e
contaminanti dell'urina ma impedisce la sciamatura delle specie di Proteus per la mancanza di
elettroliti. Questo terreno consente di differenziare i batteri recuperati tra fermentanti e non
fermentanti il lattosio.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
Bromcresol Purple Lactose Agar è una versione modificata del terreno ideato da Wurtz.1,2 È
stato aggiunto dell'estratto di carne bovina per migliorarne la produttività. Il terreno è alternativo
all'agar CLED, ma comprende un diverso indicatore pH. Come nell'agar CLED, l'assenza di
elettroliti riduce la sciamatura delle specie di Proteus, rendendo così il terreno adatto alla conta
dei batteri nelle urine.
In BD Bromcresol Purple Lactose Agar, i nutrienti sono forniti dai peptoni e dall'estratto di
carne bovina. Poiché il lattosio è l'unico zucchero contenuto in questo terreno, il porpora di
bromocresolo, un indicatore di pH, consente di differenziare i fermentanti il lattosio (che
producono acidi da questo zucchero e rendono giallo il colore del terreno intorno alle colonie)
dai non fermentanti il lattosio (blu-violetto).1 A causa dell'assenza di sodio, la sciamatura delle
specie di Proteus è ridotta o assente nella maggior parte dei ceppi di Proteus.
REAGENTI
BD Bromcresol Purple Lactose Agar
Formula* per litro di acqua purificata
Peptone
Estratto di carne bovina
Lattosio
Porpora di bromocresolo
Agar
5,0 g
3,0
10,0
0,025
15,0
pH 7.0 +/- 0,3
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazione di colore,
essiccamento, fissurazioni o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL'UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare aerobicamente a 35 – 37 °C per 18 – 24 h.
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Ceppi
Escherichia coli
ATCC 25922
Enterobacter cloacae
ATCC 13047
Proteus vulgaris ATCC 8427
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Staphylococcus saprophyticus
ATCC 15305
Non inoculate
Risultati della crescita
Crescita da buona a eccellente; colonie medie gialle; terreno
giallo intorno alle colonie
Crescita da buona a eccellente; colonie medie giallo chiaro;
terreno da giallo a bluastro intorno alle colonie
Colonie da incolori a grigio-blu, con sciamatura da parzialmente a
completamente inibita; terreno blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie piccole da violetto pallido
a gialle; terreno giallo intorno alle colonie
Crescita da discreta a eccellente; colonie piccole bianche; terreno
giallo intorno alle colonie
Blu-violetto
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Bromcresol Purple Lactose Agar (piastre impilate Stacker da 90 mm).
Microbiologicamente controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
Questo terreno viene utilizzato esclusivamente per il conteggio e la differenziazione dei batteri
nelle urine. Si può usare l'urina della minzione o del catetere, o quella raccolta mediante puntura
vescicale ipogastrica (v. anche PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA
PROCEDURA). Osservare le tecniche asettiche per il prelievo dei campioni urinari. Strisciare
l'urina direttamente sul terreno non più tardi di 2 h dopo il prelievo o conservarla in frigorifero
(non oltre 24 h) per evitare l'eccessiva crescita di agenti infettivi o contaminanti prima
dell'inoculazione del terreno.3,4 Il terreno può essere utilizzato anche per differenziare gli isolati
da altri campioni in fermentanti e non fermentanti il lattosio.
Procedura del test
Prelevare un campione di urina miscelata e non diluita usando un'ansa calibrata (0,01 o
0,001 mL). Verificare il corretto caricamento dell'ansa con il campione. Inoculare il campione a
metà della piastra su una singola striscia e da qui estendere ulteriormente la diffusione
dell'inoculo.4,5 Incubare le piastre in aria ambiente a 35 ± 2 °C per 24 – 48 h. Per la
differenziazione degli isolati presenti in altri campioni in fermentanti e non fermentanti il lattosio,
strisciare l'isolato (che deve essere una cultura pura) sul terreno per ottenere delle colonie
isolate e incubare come descritto per i campioni di urina.
Risultati
Dopo l'incubazione, le piastre vengono lette per verificare la crescita e le appropriate reazioni
cromatiche. Le colonie di organismi fermentanti il lattosio assumeranno una colorazione gialla e
saranno circondate da un alone giallo nel terreno di coltura.
Le colonie degli organismi non fermentanti il lattosio saranno da incolori a grigio-blu e non
produrranno alcuna variazione cromatica del terreno.
Calcolo e interpretazione dei risultati
Contare il numero di colonie (UFC) sulla piastra. Se è stata usata un'ansa da 0,01 mL, ogni
colonia rappresenterà 100 UFC/mL. Se invece è stata usata un'ansa da 0,001 mL, ogni colonia
corrisponderà a 1000 UFC/mL di urina.3
Urina della minzione e del catetere - Le direttive vigenti stabiliscono che se un singolo isolato ha
una densità di 105 UFC/mL è presente infezione, se la densità è <105 UFC/mL si ha
contaminazione uretrale o vaginale, mentre una densità tra 104 e 105 UFC/mL rende necessario
un riesame alla luce dei dati clinici.3,4
I batteri contaminanti in genere appaiono in numero ridotto e in colonie di differenti forme.
Urina prelevata mediante puntura vescicale ipogastrica - poiché la vescica è sterile nei soggetti
non infetti, le UFC eventualmente osservate indicano la presenza di un'infezione.
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In genere, i patogeni dell'urina presentano conte elevate e colonie dall'aspetto uniforme e le
subcolture devono essere trasferite direttamente sui terreni adatti per i test di identificazione e
sensibilità.4,5
PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Bromcresol Purple Lactose Agar è un terreno adatto all'isolamento e al conteggio di
numerosi microrganismi a crescita aerobica, quali Enterobacteriaceae, Pseudomonas e altri
bacilli Gram-negativi non fermentanti, enterococchi, stafilococchi, le specie di Candida e molti
altri ancora presenti nei campioni urinari.
Gli streptococchi e gli altri organismi che richiedono sangue o siero per crescere sono
difficilmente coltivabili su questo terreno o possono richiedere un'incubazione protratta. Il
campione, pertanto, deve essere coltivato anche su una piastra di agar sangue se si prevede la
presenza di tali organismi.
I patogeni genitourinari, quali Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia,
Ureaplasma o altri organismi esigenti non crescono su questo terreno. Consultare la bibliografia
per stabilire le tecniche di rilevamento più adatte a questi organismi.3-5
Benché sia possibile eseguire direttamente sul terreno la differenziazione in base alla
fermentazione del lattosio e altri test diagnostici, per completare l'identificazione sono
necessari test biochimici e, all'occorrenza, test immunologici con l'uso di colture pure.
Risultati delle prestazioni
In una valutazione interna, il terreno è stato testato con venti ceppi, 17 dei quali erano
Enterobacteriaceae, mentre i rimanenti tre erano cocchi Gram-positivi. Tutti i ceppi hanno
prodotto una crescita eccellente e hanno consentito la differenziazione tra fermentanti e non
fermentanti il lattosio. La sciamatura delle specie di Proteus è stata ridotta da significativamente
a completamente, per consentire il conteggio delle colonie e la purificazione delle colture miste.
I dettagli sono riportati nella tabella seguente:
Specie
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium
Escherichia coli, lattosio-positiva
Escherichia coli, lattosio-negativa
Morganella morganii
Proteus mirabilis
Proteus penneri
Proteus vulgaris
Providencia alcalifaciens
Providencia stuartii
Salmonella Abony
Salmonella Enteritidis
Salmonella Saintpaul
Salmonella Typhimurium
Shigella boydii
Shigella flexneri (2 ceppi)
Shigella sonnei (2 ceppi)
Staphylococcus aureus
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Risultati della crescita su BD Bromcresol Purple Lactose
Agar
Crescita da buona a eccellente; colonie piccole da giallastre a
bianche; terreno giallo intorno alle colonie
Crescita da buona a eccellente; colonie medio-grandi gialle;
terreno giallo intorno alle colonie
Crescita da buona a eccellente; colonie medio-grandi grigie;
terreno blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie medie grigie; terreno bluvioletto
Crescita da buona a eccellente; colonie medio-grandi grigie;
nessuna sciamatura; terreno blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie medio-grandi grigie;
piccole zone di sciamatura intorno alle singole colonie; terreno
blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie medie grigie; terreno bluvioletto
Crescita da buona a eccellente; colonie medie bianco-grigie;
terreno blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie medio-grandi biancogrigie, terreno blu-violetto
Crescita da buona a eccellente; colonie medie grigie; terreno bluvioletto
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BIBLIOGRAFIA
1. Wurtz. 1897. Techniques bactériologiques. Masson, Paris.
2. Atlas, R.M.: Handbook of Microbiological Media (L.C. Parks, editor).1993. CRC Press, Boca
Raton, USA.
3. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
4. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of
urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
5. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington,
D.C.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Bromcresol Purple Lactose Agar
N. di cat. 256501
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
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